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猪丹毒血清学诊断技术

  使用血清培养凝集试验方法检出率很高,而且快速,详细介绍如下。

  

  (1)血清培养凝集试验

  

  在3%胰蛋白胨肉膏汤(或肝化汤)中,加人(1:40)-(1:80)的丹毒高免血清,同时每毫升再加入400leg卡那霉素50/lg庆大霉素及2Stag万古霉素(缺乏抗生素时,可加0.05%叠氦钠及0.0005%结晶紫),制成丹毒血清抗生素诊断液(如分装安瓿瓶管置4~C冰箱内可至少保存2个月)。生前取病猪耳尖血1滴,死后则蘸取病料少许于安瓿瓶管内,37℃培养14-24h。凡管底出现凝集颗粒或团块时即判为阳性。

  

  (2)荧光抗体检查法

  

  用荧光素标记的猪丹毒免疫球蛋白制成荧光抗体与病料涂片中的猪丹毒病菌发生特异性结合,在荧光显微镜下观察,可见亮绿色菌体,即可判猪丹毒阳性,是猪丹毒快速检疫的方法之一。

  

  (3)Dot-PAA-ELISA方法

  

  肖国生、曹三杰、文心田等应用Dot-PAA-ELISA方法快速检测猪丹毒抗体。以猪丹毒CD3004(1a型)和C43-12(2型)菌株为抗原,EDTA渗透法提取的抗原作为膜载抗原,建立了Dot-PAA-ELISA检测猪丹毒血清抗体方法,经研究确定了Dot-PAA-ELISA的最佳工作条件。试验制备的诊断膜片特异性强,不与猪瘟、猪伪狂犬病、猪肺疫、猪链球菌病、猪大肠杆菌病、仔猪副伤寒、猪布氏杆菌病、猪衣原体病的阳性血清发生交叉反应;灵敏度高,能够最低检出猪血清中含2161X10-9g的猪IgG抗体;膜片保存期长,在室温可保存4个月,4℃可保存7个月其检测活性不变。用该方法检测了仔猪免疫后抗体变化,并通过猪丹毒三型混合强毒攻毒试验确定了猪能抗强毒攻击的抗体临界保护值为1:32。对336份血清进行猪丹毒抗体检测,阳性检出率为96.13%。试验结果表明,本试验方法操作简便、快速准确、结果可存档、重复性和稳定性好,所用试剂材料均可做到标准化,适合基层检疫单位和养猪企业用于猪群免疫监测和猪丹毒流行病学调查。

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